Modulo di Biochimica Applicata (Farmacia) Corso di Biochimica e Biochimica Applicata

Il modulo di Biochimica Applicata si propone di fornire agli studenti le basi delle diverse metodologie per la purificazione delle macromolecole biologiche e per la loro caratterizzazione strutturale e funzionale, con particolare riferimento alle strategie applicate allo studio delle proteine. Dall’AA 2012-2013 il modulo di Biochimica Applicata prevede 1 CFU di laboratorio (frequenza obbligatoria). Durante le attività pratiche in laboratorio gli studenti eseguono le tecniche cromatografiche, elettroforetiche e fotometriche. La parte pratica è completata dalla discussione in aula di esercizi pratici che saranno proposti nelle prove di esame (costituita esclusivamente da una prova scritta)

PROGRAMMA del Modulo di Biochimica Applicata (FARMACIA)  II anno, II semestre, 3 CFU – AA 2016-2017

Strategie per la purificazione delle proteine. Protocolli di purificazione. Passaggi iniziali di purificazione. Precipitazione frazionata delle proteine in funzione della forza ionica.

Tecniche spettroscopiche: Spettrofotometria UV/VIS. Legge di Lambert-Beer. Determinazione della concentrazione delle proteine totali mediante metodo di Bradford. Spettri di assorbimento delle principali molecole di interesse biologico.

Tecniche cromatografiche: principi generali e descrizione delle metodiche analitiche e preparative utilizzate per la purificazione di proteine. Sistemi cromatografici su colonna a bassa pressione: cromatografia a scambio ionico, cromatografia ad esclusione molecolare. Determinazione del PM delle proteine.

Tecniche elettroforetiche: principi generali. Elettroforesi zonale: apparecchi per i diversi supporti utilizzati (cellulosa, acetato di cellulosa, gel di poliacrilamide). Elettroforesi di proteine su gel di poliacrilamide in condizioni native  e in presenza di sodio-dodecil-solfato (SDS-PAGE).Determinazione del PM delle proteine. Isoelettrofocalizzazione e determinazione del punto isoelettrico delle proteine. Elettroforesi bidimensionale. Rivelazione colorimetrica mediante Coomassie Brillant Blue.

Libro di Testo Consigliato: M.C. Bonaccorsi di Patti, R. Contestabile, M.L. Di Salvo, Metodologie Biochimiche. Casa Editrice Ambrosiana, 2012

Altro testo da consultare per specifici argomenti: M. Stoppini, V. Bellotti. Biochimica applicata EdiSES  2012