DIAGNOSI DI LABORATORIO PER INFEZIONE DA NOCARDIA SPP. TRAMITE PCR REAL TIME

F. Coghe;P. Melis;SCANO, ALESSANDRA;F. Puggioni;FAIS, SARA;SERAFI, GIUSEPPE;P. Ferraguti;M. Pautasso;SERRELI, GABRIELE;A. Gigante;ORRU, GERMANO

2016-01-01

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Abstract

Obiettivi: Diversi microrganismi appartenenti al genere Nocardia spp. possono causare infezioni eterogenee nell’uomo quali: malattie respiratorie, ascessi cerebrali, lesioni meningee, infezioni cutanee, articolari e oculari e le specie più frequentemente isolate sono N. asteroides e N. brasiliensis. La prognosi è favorevole, tranne nei casi di nocardiosi disseminata nei pazienti immunocompromessi. La diagnosi di laboratorio tradizionale a volte non è semplice e in genere si basa sull’osservazione microscopica del campione e sull’esame colturale. Lo scopo del lavoro è stato quello di utilizzare metodiche molecolari, quale la PCR real time, per arrivare a una diagnosi di laboratorio più veloce e specifica. Materiali e metodi: Il DNA proveniente da diversi campioni, biopsie o tamponi cutanei prelevati da pazienti con sospetta Nocardiosi, e’ stato sottoposto ad amplificazione tramite PCR real time (light-Cycler Roche). La PCR amplificava un segmento di 228 bp lungo il gene rrs specifico per Nocardia spp; nei casi dubbi o dove è richiesta l’identificazione di specie, e’ stato possibile sequenziare l’amplicone con metodo capillare. La positività è stata valutata tramite l’analisi della curva di melting (Tm=91 °C) o tramite gel di agarosio. I risultati sono stati confrontati con il metodo colturale. Come controllo positivo è stato utilizzato e un ceppo di collezione di N. seriolae (ATCC 43993). Risultati: La procedura utilizzata è risultata più veloce (4 ore) e sensibile rispetto al metodo colturale tradizionale, il limite di rilevamento della PCR è risultato essere pari a (500 copie DNA/PCR). Conclusioni: La procedura descritta potrebbe dare dei benefici nella diagnosi di laboratorio per Nocardia spp. In particolare nei casi di campioni negativi alla coltura e positivi al microscopio per forme alcool resistenti. 1. Brown-Elliott BA, Brown JM, Conville PS, et al. Clinical and laboratory features of the nocardia spp. based on current molecular taxonomy. Clinical Microbiology Reviews 2006;19:259-82. 2. Wehrhahn MC, Xiao M, Kong F, et al. A PCR-based intergenic spacer region-capillary gel electrophoresis typing method for identification and subtyping of Nocardia species. J Clin Microbiol 2012;50:3478-84.